Указанные свойства яда определяют два крайних состояния чувствительности организма человека к этому токсину — сверхчувствительность с аллергическими проявлениями, и наоборот, нечувствительность пчеловодов к его действию, их устойчивость. Обе эти реакции, как и промежуточные, сегодня достаточно полно объясняются с позиций иммунологии.
Иммунная система человеческого организма так же жизненно необходима, как и пищеварительная, нервная, сердечно-сосудистая и т.д. Это основная система, защищающая организм как от внешних опасностей, так и от угрозы внутренних повреждений его целостности, чужеродности. К иммунной системе относятся клетки нескольких типов — лейкоциты, лимфоциты и др., образующиеся в костном мозге, селезенке и некоторых других органах. В процессе своего развития клетки разносятся в разные ткани организма, где и осуществляют иммунологический надзор, т.е. распознают и уничтожают любой чужеродный агент, несущий опасность для организма. При этом клетки системы могут или непосредственно поглощать чужеродный материал (фагоцитоз), или выбрасывать вещества (антитела), связывающие и нейтрализующие этот материал (антиген). Распознавание «не-своего» происходит благодаря наличию в чужеродном материале специфических участков молекулы — детерминант. Соответственно, чем больше молекула, тем более, целый микроорганизм, тем больше они имеют антигенных детерминант, — тем сильней и быстрей пройдет реакция узнавания и уничтожения (первичный иммунный ответ). В дальнейшем память об этих детерминантах остается в некоторых клетках системы — лимфоцитах, и при новой (повторной) встрече с такими «не-свои-ми» лимфоциты способны быстро воспроизводить дочерние клетки с нужными антителами. Ясно, что повторная встреча протекает гораздо быстрее и эффективнее, чем первая (вторичный иммунный ответ). Совокупность перечисленных реакций обычно объединяют понятием иммунитет, который и защищает организм от проникновения и разрушительного действия токсинов или микроорганизмов, различных антигенов, аллергенов.
В некоторых случаях повторное попадание в организм антигена вызывает очень бурную реакцию связывания с антителами, которая затрагивает весь организм и приводит к разрушительному эффекту (организм не справляется с такой реакцией адекватно) — клиническому заболеванию аллергии (анафилаксия). В связи с особенностями действия таких антигенов их называют аллергенами.
Из вышеизложенного следует, что пчелиный яд, имеющий компонентами ряд разновеликих цепей белков и полипептидов, является типичным аллергеном (антигеном). Разумеется, разные компоненты обладают разной аллергентной (антигенной) активностью. Считается, что наибольшее количество антигенных детерминант несет фосфолипаза А яда, гиалуронидаза. По некоторым данным мелиттин несет 1/9 часть аллергентной активности цельного яда, а апамин имеет всего одну антигенную детерминанту, что делает его удобным объектом — инструментом в иммунологических исследованиях (Гущин с соавт., 1990; Василенко, 1985).
При попадании в организм человека пчелиного яда развиваются типичные иммунологические реакции — первичный и вторичный ответы с соответствующей выработкой антител на компоненты яда. Характеризуя антитела вообще, следует указать, что они представляют собой белки, называемые иммуноглобулинами. Организм способен производить тысячи видов антител различной специфичности, в соответствии со «спецификой» чужеродного материала. Сегодня иммуноглобулины объединены в 5 классов, в зависимости от молекулярной массы и общих свойств: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Считается, что IgG — основной класс антител (около 75% всех иммуноглобулинов), именно он осуществляет вторичный иммунный ответ. Из других классов отметим IgE, так как полагают, что это основной участник аллергических реакций организма. В частности, установлено, что связав аллерген, IgE одновременно взаимодействует с лейкоцитами, тучными клетками, увеличивая проницаемость их мембран. В результате происходит выброс из клеток гистамина, серотонина, гепарина и других физиологически активных веществ, приводящий к аллергической реакции всего организма — анафилаксии.
В связи с изложенным следует ожидать, что основную роль в реагировании на пчелиный яд будут играть иммуноглобулины IgG и IgE. Действительно, было установлено, что в ответ на курсовое введение как цельного яда, так и его фракций, в сыворотке крови человека нарастает титр антител того и другого класса. При этом увеличение количества IgE-антител обычно предшествует нараста-
нию количества IgG-антител. С течением времени титр IgE-антител, специфичных к пчелиному яду, убывал, тогда как количество IgG-антител удерживалось на максимально высоких значениях около года (Шкендеров и др., 1976).
Для объяснения сверхчувствительности к пчелиному яду одних людей и устойчивости других важное значение имеют исследования содержания указанных антител к яду в крови аллергиков и пчеловодов, мало восприимчивых к нему. Шкендеров, Иванов (1985) указывают, что у пчеловодов уровень содержания IgG и IgE был выше, чем у местных жителей, не занимающихся пчеловодством. При этом установлено, что чем выше уровень IgG, тем легче пчеловоды переносят ужаления. В то же время, сыворотка крови аллергиков на пчелиный яд содержит существенно меньше антител IgG, чем у нормальных людей (соответственно, в среднем 7,6 ед/мл и 59 ед/мл).
Урбанек с соавт. (1980) отмечают, что уровень антител класса IgG у пчеловодов был наиболее высоким осенью, в конце пчеловодческого сезона. Пчелоужаления в это время вызывали у них самые слабые изменения кожи. Делается вывод, что для поддержания иммунитета к пчелиному яду необходимо его систематическое поступление в организм. Именно на этом и основано современное лечение аллергии к пчелиному яду: в организм вводятся медленно нарастающие дозы пчелиного яда. Показано, что при таком лечении можно снизить содержание антител IgE в крови и одновременно повысить титр антител IgG. В дальнейшем пролеченные таким образом больные переносят пчелиные ужаления без аллергических проявлений.
Вышеуказанный метод лечения аллергиков сегодня широко разрабатывается. Изучается возможность использования не только Цельного яда, но и отдельных его компонентов и приготовленных из них готовых лекарственных форм аллергенов (Гущин с соавт., 1984, 1985; Титова, Романова, 1989). Кроме того, оказалось, что и Диагностировать аллергиков так же эффективно, если используются отдельные аллергены из пчелиного яда. Более того, таким путем — делая пробы с введением аллергенов пчелиного яда — можно Диагностировать аллергиков к широкому спектру аллергенов, а не только к пчелиному яду. То есть повышенная чувствительность человека к ужалению пчелами — это естественная модель наиболее остро и тяжело протекающих аллергических реакций, возникающих в ответ на введение чужеродного материала в организм (Гу-щин с соавт., 1984). При этом не обязательно определять уровень
антител в крови, достаточно оценить уровень физиологически активных веществ, высвобожденных из тучных клеток, лейкоцитов и др., например, гистамина.
Выявленное увеличение содержания в организме под влиянием пчелиного яда антител, в том числе и чисто защитных (IgG), приводит к идее стимулирования ядом общего иммунитета человека. Известно, что по формированию и степени выраженности антитело образования судят о состоянии иммунной системы организма (Здродовский, 1969). Укажем, что поиск эффективных иммуностимуляторов в настоящее время является чрезвычайно важной задачей иммунологов. Так может ли пчелиный яд защитить организм от инфекций или других токсинов?
Еще в 1932 году Физалис показала, что иммунитет, выработанный у мышей и морских свинок путем многократного введения пчелиного яда, предохраняет их от смертельной дозы яда гадюки (перекрестный иммунитет). Савчук и др. (1960) установили, что при определенной дозировке (до 10 ужалений) у больных пчелиный яд стимулировал выработку агглютининов (один из видов антител) и увеличивал фагоцитарную активность лейкоцитов.
В дальнейших исследованиях, уже при моделировании инфекций или инъекций чужеродного материала, было установлено, что иммунотропные свойства пчелиного яда зависят от вводимой его дозы. Так, Солодухо, Нестерова (1970, 1974) при иммунизации животных протеем (условно патогенный микроорганизм) установили, что пчелиный яд в дозе 0,35 мг/кг тормозил фагоцитарную активность лейкоцитов к протею, так же как и выработку специфических антител к нему. Аналогичные результаты были получены в опытах Романовой (1980-1987). Автор на модели первичного иммунного ответа на введение эритроцитов барана мышам, установила, что пчелиный яд в дозах 2-5 мг/кг проявлял иммунодепрессивный эффект, уменьшая количество антителообразующих клеток (АОК) к чужеродным эритроцитам и снижая титр антител. Вместе с тем, в опытах было установлено, что малые дозы яда 0,1 мг/кг, (т.е. обычные терапевтические для животных), наоборот, стимулировали антителообразование, увеличивая количество АОК на 20%.
Из анализа литературных данных следует, что угнетение иммунного ответа при введении пчелиного яда животным происходит, если используются высокие дозы яда (0,5-5 мг/кг). Между тем, при апитерапии пчелоужалениями соответствующая инструкция МЗ СССР 1959 года рекомендует максимальное задействование в
процедуре не более 20 пчел. Учитывая, что ядовитый резервуар одной пчелы содержит 0,1-0,2 мг сухого вещества, можно рассчитать, что суммарная терапевтическая доза яда для человека составит не более 0,05 мг/кг. Как видно, это на порядок и более меньше доз и концентраций, которые используются в экспериментах, где анализировались аллергентные и иммунологические свойства пчелиного яда.
В связи с изложенным мы изучили иммунотропные свойства малых доз пчелиного яда, сопоставимых с рекомендуемыми терапевтическими. В первой серии опытов на клеточном уровне — на апробированной системе выделенных иммунокомпетентных клетках (лимфоциты) крови практически здоровых людей (доноры) оценивалась по тесту с трипановым синим физиологическая и цитоток-сическая концентрация яда. Было установлено, что минимальная концентрация, обладающая цитотоксическим действием, составляет 15 мкг/мл. Физиологическая концентрация, не влияющая на жизнеспособность лимфоцитов человека при непосредственном контакте, но обладающая иммунотропным действием, оказалась 6-10 мкг/мл. Было показано, что применение этих концентраций на модельной системе комплемента сыворотки морской свинки (Мо-тавкина, 1980) приводило к повышению комплементарной активности на 112±1,7% (Добротина и др., 1994)
Далее в экспериментах на крысах оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (Лебедев, Понякина, 1990). Было установлено, что пчелиный яд уже в концентрации 0,02 мкг/мл при введении в исследуемую пробу приводил к тенденции повышения фагоцитарной активности, а при использовании концентрации 0,2 мкг/мл существенно (Р < 0,05) повышал фагоцитоз нейтрофилов.
С другой стороны, было выявлено, что указанные минимальные концентрации яда (0,02-0,2 мкг/мл) уменьшают способность Т-клеток к розеткообразованию с эритроцитами барана (Ляпон, 1980). При этом наблюдались не только количественные, но и качественные изменения классической реакции — уменьшалось число эритроцитов, составляющих розетку.
С целью оценки адекватной иммунореактивности клеток иссле-Довали также реакцию торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Указанная реакция основана на феномене подавления миграции фактором, который выделяют сенсибилизированные лимфоциты при взаимодействии со специфическим антигеном (фактор, инги-бирующий миграцию лейкоцитов — МИФ). Данный фактор не яв-
ляется видоспецифичным. Постановка опытов с ядом или ФГА осуществлялась следующим образом: гепаринизированную кровь крыс инкубировали с ядом или ФГА в стеклянных капиллярах в течение 18 часов при 37° С, после предварительного центрифугирования. За это время лейкоциты мигрируют, образуя визуально обнаруживаемую зону помутнения — зону миграции, которую вычисляли, измеряя под микроскопом в условных единицах. Было установлено, что применение вышеназванных минимальных концентрация яда приводило к существенному снижению скорости миграции лейкоцитов. Так, если в контроле она составила 78±11,8 усл. ед.; с ФГА — 61,6±5 усл. ед., то при добавлении пчелиного яда в концентрации 0,02 мкг/мл — 45±3 усл. ед. (Р < 0,05).
Оценивая полученные результаты, можно заключить, что пчелиный яд уже в малых концентрациях, сопоставимых с терапевтическими дозами яда, обладает иммуномодулирующим действием. Указанное действие многокомпонентно и разнонаправленно: с одной стороны, стимулируется фагоцитоз и комплементарная активность, а с другой — тормозится реакция розеткообразования и скорость миграции лейкоцитов.
Из приведенного материала следует сделать вывод, что стимуляция иммунной системы обеспечивается постепенным поступлением в организм пчелиного яда в малых дозах. Более эффективны в этом плане отдельные компоненты яда, которые можно легко дозировать в соответствии с их аллергентной активностью. Так, Шкендеров с соавт. (1974, 1985) указывает, что введение высокомолекулярной фракции яда приводило к увеличению в два раза числа гемолизинсинтезирующих клеток, а мелиттин в дозах 20 мкг/мл оказался эффективен при лечении воспалений при инфицировании палочки Коха. Авторы ссылаются также на канадских исследователей, установивших, что мелиттин эффективно стимулирует иммунный ответ в отношении ряда других антигенов.
Обсуждая вопрос о возможности стимулирования защитных сил организма пчелиным ядом, следует указать, что кроме иммунных специфических реакций в ответ на внедрение «не своего» в нем активируются и неспецифические защитные механизмы. Они защищают организм от чужеродного материала как непосредственно, так и оказывая влияние на формирование специфического иммунного ответа. В связи с этим интересно отметить представления Артемова Н.М. (1962) об отсутствии специфического иммунитета на пчелиный яд или мелиттин вообще — есть только сложные
процессы адаптации и повышение резистентности организма к пчелиному яду, что и наблюдается у пчеловодов. Хотя с современных позиций это предположение устарело, однако его можно принять с позиций неспецифического иммунитета.
Было установлено, что пчелиный яд при введении в организм человека или животных вызывает активацию неспецифических защитных механизмов — фагоцитарную активность лейкоцитов, увеличение «естественных» антител — белков типа лизоцима, про-пердина и др. Романова, Курило (1984) установили, что введение крысам пчелиного яда в дозе 2 мг/кг после первоначального снижения, к 7-м суткам увеличивало содержание в крови таких факторов неспецифической защиты как комплемент, лизоцим, бактерицидная активность сыворотки крови. Другие исследователи показали, что при лечении пчелиным ядом больных туберкулезом, в крови повышалось содержание титра пропердина (Hazzenga, Reginato, 1959).
Как указывалось выше, развитие специфических и неспецифических защитных реакций в организме взаимосвязано, и зависит от степени чужеродности попавшего в организм материала. Соответственно, в одних случаях в большей степени проявляются реакции неспецифической защиты, в других — специфического иммунного ответа. Пчелиный яд в этом плане, в силу своей гетерогенности, вполне может вызвать разнонаправленные ответы организма. Это доказывают наши эксперименты, в которых изучалось влияние яда на динамику одновременно текущих в организме крыс иммунных процессов: регуляцию численности кожного стафилококка и инактивацию инфицированного в глаза патогенного золотистого стафилококка. Крысам в течение 8 суток внутрибрюшинно вводился пчелиный яд в дозе 0,2 мг/кг, после чего производилось моделирование инфекционного конъюнктивита. При этом оказалось, Что на 6-8 день опытов в коже уменьшалась численность постоянно присутствующего здесь эпителиального стафилококка. В противоположность этому, течение инфекционного конъюнктивита у животных, которым профилактически вводился пчелиный яд, было более выражено и длилось дольше, чем у контрольных животных, Которым яд не вводился.
Угнетение пчелиным ядом специфических иммунных реакций Против инфекции золотистого стафилококка, установленное в опытах, согласуется с приведенными выше данными других авто-Ров, и объясняется применением высоких доз яда. Мы полагаем, Что основные механизмы угнетения иммунного ответа в этих слу-
чаях развиваются в результате активации пчелиным ядом гипофи-зарно-надпочечниковой системы с соответствующим выбросом в кровь стресс-агентов: катехоламинов, кортикостероидов. Известно, что при повышении в организме таких стресс-агентов иммунный специфический ответ угнетается (Лоуренс, 1991). Поэтому при лечении людей кортикостероидами всегда оговаривается опасность инфекций и рекомендуется одновременное назначение антибиотиков. Полагают, что одним из механизмов такого торможения может быть блокирование катехоламинами соответствующих рецепторов антитело-антиген (Landmann, 1984). Кортикостероиды как противовоспалительные агенты, тормозят развитие иммунных реакций на многих этапах: размножение лимфоцитов, их активация, передвижение к очагу инфекции и т.д. (Горизонтов, 1980). Следует полагать, что применение малых доз яда, оказывающее иммуностимулирующее действие, не приводит к вышеописанной стресс-реакции.
Наоборот, именно с позиций развития стрессовой реакции у животных следует объяснять установленный в наших опытах эффект уменьшения численности эпителиального стафилококка в коже крыс, которым вводился пчелиный яд. Дело в том, что кожный стафилококк — постоянно присутствующий микроорганизм, на который организм-хозяин в силу длительного сосуществования выработал оптимальную защиту в виде регулирования его численности неспецифическими факторами: присутствующими в коже лейкоцитами, выделяемыми ими веществами неспецифической защиты — лизоцим, и др. Как было показано выше, именно на 6-8 день после введения пчелиного яда количество таких веществ в организме животных существенно возрастает. Кроме того, установлено, что это возрастание может быть запущено именно стрессовой реакцией, так как известно, что при таких реакциях резко активируется лейкопоэз с увеличением в крови и тканях лейкоцитов с их фагоцитирующей активностью (Горизонтов, 1980). Лейкоциты же — основной поставщик указанных выше факторов неспецифической защиты: лизоцима, бактериальной активности сыворотки и
др.
Из приведенных данных следует заключить, что проявление им-муномодулирующих свойств пчелиного яда будет зависеть как от действующей дозы, так и от специфичности или не специфичности патологического агента, являющегося объектом апитерапии.
Из обзора данных об иммунологических свойствах пчелиного яда становится понятно также, почему он противопоказан при ин-
фекционных заболеваниях. Во всяком случае, при апитерапии, так же, как и при гормонотерапии, следует учитывать опасность инфекционных осложнений и рекомендовать в таких случаях антибиотики. Вместе с тем, нельзя не отметить, что в малых дозах, обычно используемых при апитерапии, пчелиный яд может проявлять и иммуностимулирующие свойства. Можно даже предположить, что успешное лечение ядом ряда ревматоидных заболеваний опосредовано не только его противовоспалительным, но и иммуностимулирующим действием (если принять теорию о ревматоидном процессе как аутоиммунном процессе).
Механизмы иммуностимуляции пчелиным ядом, видимо, разнообразны. Один из них может быть связан с фосфолипазой А яда (ФЛА2), которой в нем 10-12%. Известно, что синтез антител в лимфоците может быть опосредован через активацию ФЛА2 мито-геном. В дальнейшем ФЛА2 мембраны лимфоцита вступает в реакции с арахидоновой кислотой, образуя спектр веществ (простаг-ландины, тромбоксаны, медленно реагирующие вещества и т.д.). В свою очередь, простагландины активируют циклические нуклеотиды ядра с последующей активацией синтеза РНК и белков-антител (Пол и др., 1987). Несомненно, экзогенная фосфолипаза из яда пчел может непосредственно участвовать в указанных процессах.