Кроме гемолитического теста, определяющего активность мелиттина и фосфолипазы А, применяется и непосредственное определение ферментативной активности яда. При этом руководствуются тем, что и фосфолипаза А и гиалуронидаза являются ферментами, т.е. веществами, катализирующими (ускоряющими) определенные реакции в организме или в пробирке. На основании этих реакций вычисляется ферментативная активность в единицах действия — чем выше активность фермента, тем большее количество единиц действия он содержит. Поясним сказанное следующим примером. Имеется фермент А, который ускоряет расщепление (заставляет разрушаться) вещество Б (субстрат). В результате вещество Б распадается на молекулу С и Д. Соответственно, чем выше активность фермента, тем больше в растворе появится молекул С и Д. Остается их сосчитать. Это трудно, да и незачем. Можно добавить в пробирку вещество И (индикатор), которое свяжет или С или Д. Остается подобрать такое вещество И, чтобы в результате его реакции с С или Д, образовалось вещество К, поглощающее свет. Такое вещество окрасит раствор, он будет цветным. При этом чем ярче цвет, тем больше молекул его образует, тем больше их в растворе. Интенсивность же окраски раствора можно измерить приборами — фотоколориметрами, спектрофотометрами и т.д. Так косвенно можно вычислить не только активность, но и количество молекул фермента.
В настоящее время используют измерение активности фосфолипазы и гиалуронидазы в международных единицах действия. Разумеется, методы определения ферментативной активности, по сути, активности яда, достаточно сложны и требуют как соответствующего лабораторного оборудования, так и определенных навыков работы.
Некоторые из приведенных методов вошли в показатели качества пчелиного яда, оформленные в виде стандартов. Первый из них: технологические условия (ТУ 46 РСФСР 67-72) устарели, и сегодня пользуются в основном Фармакопейной статьей СССР (ФС 42-26583-89 «Яд пчелиный»), разработанной нами совместно с Рижским мединститутом. Ниже приводятся показатели указанной ФС — показатели качества пчелиного яда .
Как следует из таблицы, некоторые показатели можно определить, не прибегая к биохимическим методам. Ниже приводится методика определения физико-химических показателей (примесей и влажности), имеющих важное значение для коррекции процесса отбора яда, которые можно выполнить в условиях пасеки, при наличии термостата и соответствующей посуды
Определение потери массы пчелиного яда при высушивании (влажность)
Определение потери массы при высушивании образцов пчелиного яда проводится согласно ГФ X, С. 760 и ГФ XI, Т. 1, С. 176 (Государственная фармакопея СССР X изд., 1986; Государственная фармакопея СССР XI изд., 1987).
Методика. Около 0,1 г (точная навеска) по 3 навески каждого образца пчелиного яда высушивают при температуре 100-105° до постоянной массы.
Подсчет результатов: потери массы при высушивании в % (с точностью до 0,1 процента) вычисляют по формуле:

Все подробности каталог марок фауна у нас на сайте.


Страницы: 1 2 3 4 5