Соматическая полиплоидизация — широко распространенное явление, присущее и животному, и растительному миру.
Клетки с разной степенью плоидности у пчел наблюдали ряд авторов (Petrunkewttch, 1913; Merriam a. Ris, 1954; Risler, 1954; Knytel, 1967; M. Г. Стекольщиков, 1970), но они не проследили изменение плоидности соматических клеток у разных стаз Apis mellifera L. в онтогенезе.
Для более полной характеристики плоидности клеток тканей пчелы (Apis mellifera l~), особенно таких, где увеличение числа хромосом идет путем эндомитоза и подсчет их затруднен, было проведено цитофотометричесхое изучение содержания ДНК интерфазных ядер.
Относительное содержание ДНК определяли методом двухволно-вон цитофотометрии на цитофотометре ИЦИГ (конструкция цитофото-метра и расчет количества ДНК описаны Шерудило, 1964,1968).
В двух длинах волн измерялись световые потоки через ядро (величина поглощения в ядре пропорциональна количеству связанного с ДНК фуксина).
Для цитофотометрирования мы использовали следующие ткани личинок, предкуколок, куколок и имаго трутней и рабочих пчел, фиксированных в смеси спирта и уксусной кислоты (3il): гиподерму, жировое тело, эноциты, среднюю кишку, мальпигиевы сосуды.
Названные ткани препарировали в разбавленном спирте в чашке Петри, дно которой было покрыто слоем воска, под бинокулярной лупой. Отпрепарированную ткань помещали в размягчающую смесь (по Дыбан, 1970). Затем ткань переносили на предметное стекло в каплю 45 %-ной уксусной кислоты, накрывали покровным стеклом и слегка давили. Замораживали жидким азотом, удаляли покровное стекло, препарат помещали на 5 мин в 96-градусный этиловый спирт. После этого препарат подсушивали на воздухе.
Окрашивали препараты реактивом Шиффа (по прописи де Томаэи -Пирс, 1962), с рН, доведенным до 3,2 (Шерудило, 1965). Гидролиз проводили в 1 н. НС1 при 60 *С в термостате в течение 9 мин (время установлено нами по кривой гидролиза). Изучено было 15 000 ядер.
Исходным эталоном ДНК (обозначили его буквой с) служили данные анализа гистограммы, построенной по результатам цитофото-метрии ядер спермиев трутня (200 ядер).
Из анализа данных цитофотометрии следует, что в ходе развития стаз Apis meliifera L. уже с ранней личиночной стадии отмечается увеличение содержания ДНК в ядре в разных тканях в разной степени. Так, плоидность гиподермы на первом этапе личиночного развития увеличивается до 32с (4 редупликации). На второй стадии личиночного развития различаются два пика плоидности — около 8с и 32с и у самцов, и у самок. У трутня в гиподерме встречаются единичные клетки с плоидностью до 64с (5 редупликаций).
У предкуколок содержание ДНК на ядро составляет 32с На последнем этапе развития пчелы встречаются в основном ядра плоидности 32с ДНК, хотя встречаются классы и меньшей плоидности 16с-8с-4с.


Страницы: 1 2 3